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產品分類
 
·PCR
 
 





Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)
 產品貨號: RTP 7104
 產品名稱: Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)
 產品價格/規格: 60次/1000次 300元
 產品說明書: 暫無
 更新時間: 2020-04-19
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    Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)


    試劑盒內容及保存:

    貨號

    產品名稱

    包裝

    貯存方式

    RTP7104-01

    考馬斯亮藍G-250 plus染色液

    200 ml

    4

     

    牛血清白蛋白(BSA)標準溶液(5 mg/ml

    2×1 ml

    -20

     

    PBS溶液

    10 ml

    4

     

    說明書

    1

     

    儲存條件和效期:

    考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光保存;牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。

    產品簡介:

    Bradford蛋白質濃度測定試劑盒(去垢劑還原劑兼容型)是根據考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質結合,使得染料最大吸收峰從465nm變為595nm,在一定的線性范圍內,反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比,測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。該產品經過配方優化,兼容一定濃度的還原劑和去垢劑。

    每個試劑盒可以檢測1000個樣品(使用微孔板)或60個樣品(使用試管)

    產品特點:

    1. 檢測速度極快,10個樣品只需不足10分鐘即可完成。

    2. 靈敏度高,檢測濃度下限可達25μg/ml (測定濃度范圍在50-1000μg/ml內有較好的線性關系),最小檢測蛋白量可達0.5μg。

    3. 該試劑盒測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M,DTT的濃度可高達50 mM。同時,此方法測定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響,可以適用于膜蛋白樣品的濃度測定。蛋白樣品中SDS濃度低于0. 1%,Triton X-100濃度低于1%,Tween 20, 60, 80濃度低于1%,NP-40濃度低于1%都可以定量。

    操作方法

    微孔板測定程序:(工作范圍25-1000 μg/ml

    1.  G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻;

    2.  1mg/ml蛋白標準品配制:室溫完全溶解蛋白標準品,取20μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入80μl PBS溶液,使其終濃度為1 mg/ml

    3.  按照下表配制BSA標準測定溶液:

    4.   

    編號

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

     

    1 mg/ml BSA 標準溶液 μl

    BSA標準溶液 μl

    0

    0.5

    1.5

    2.5

    5.0

    7.5

    10

    15

    20

    PBS 溶液 μl

    20

    19.5

    18.5

    17.5

    15

    12.5

    10

    5

    0

    BSA終濃度 μg/ml

    0

    25

    75

    125

    250

    350

    500

    750

    1000

    總體積 μl

    20 μl

    5.  將適當體積的待測樣品加入到微孔板中,并用PBS補足到20 μl

    6.  向微孔板中加入200 μl G-250染色液,混勻,室溫放置3-5分鐘;

    7.  測定595 nm 處的吸光值,并記錄讀數;以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。

    8.  A595為縱坐標,BSA含量為橫坐標,繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內,請稀釋樣品后重新測定。

    試管測定程序:(工作范圍25-1000 μg/ml

    1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻;

    2. 1mg/ml蛋白標準品配制:室溫完全溶解蛋白標準品,取100 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入400 μl PBS溶液,使其終濃度為1.0 mg/ml

    3. 按照下表配制BSA標準測定溶液:

    編號

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

     

    1 mg/ml BSA 標準溶液 μl

    BSA標準溶液 μl

    0

    2.5

    7.5

    12.5

    25

    35

    50

    75

    100

    PBS 溶液 μl

    100

    97.5

    92.5

    87.5

    75

    65

    50

    25

    0

    BSA終濃度 μg/ml

    0

    25

    75

    125

    250

    350

    500

    750

    1000

    總體積 μl

    100 μl

    4. 將適當體積的待測樣品加入到試管中,并用PBS補足到100 μl

    5. 向試管中加入2 ml G-250染色液,混勻,室溫放置3-5分鐘;

    6. 測定595 nm 處的吸光值,并記錄讀數;以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。

    7. A595為縱坐標,BSA含量為橫坐標,繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內,請稀釋樣品后重新測定。


      References

    1.Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54.


    實驗示例:


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