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超低分子量蛋白電泳試劑盒
 產品貨號: RTD6120
 產品名稱: 超低分子量蛋白電泳試劑盒
 產品價格/規格: 10次/1000元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2020-04-06
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  • 超低分子量蛋白電泳試劑盒(貨號:RTD6120

    ●     產品組成:

    組分貨號

    組分

    名稱

    規格

    貯存

    運輸

    RTD6120-01

    組分1

    2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

    15 ml

    4

    常溫

    RTD6120-02

    組分2

    2×多肽電泳分離膠緩沖液

    30 ml

    4

    常溫

    RTD6120-03

    組分3

    2×PAA溶液 超低濃縮膠用

    15 ml

    4

    常溫

    RTD6120-04

    組分4

    2×PAA溶液 超低分離膠用

    30 ml

    4

    常溫

    AP020P

    組分5

    10% APS(干粉)

    5 ml

    常溫

    常溫

    TA0761-01

    組分6

    TEMED

    0.5 ml

    常溫

    常溫

    CB010P

    組分7

    10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)

    500 ml(干粉)

    常溫

    常溫

    TP050

    組分8

    2×Tricine 上樣緩沖液(含還原劑)

    1 ml

    -20

    常溫

    RTD6202-02

    組分9

    FastBlue蛋白染色液

    500 ml

    常溫

    常溫

    產品簡介:

    本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑,可以用來檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規大小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:

    1 適用范圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,適用于多肽的變性和非變性電泳。

    2 分辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可以有效分離1-5kD多肽。

    3 穩定性高:凝膠緩沖液pH為中性,存放時間長。

    4 使用方便:配制凝膠時只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝膠。

    貯存和效期:

    按照標簽溫度貯存;開封后有效期一年。

    使用說明:

    . 10% APS配制:

    10% APS配制-5 ml將APS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

    . 制膠:

    I 配制分離膠

    1.按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    表一  (一塊1 mm mini膠用量)*

     

    分離膠

    濃縮膠

     

    18T /5 ml

    5T /2 ml

    2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

    /

    1 ml

    2×多肽電泳分離膠緩沖液

    2.5 ml

    /

    2×PAA溶液 超低濃縮膠用

    /

    1 ml

    2×PAA溶液 超低分離膠用

    2.5 ml

    /

    10APS

    25-50 μl**

    20-30 μl

    TEMED

    2.5-5 μl

    2 μl




    注: * 如非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。

    ** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可以根據表二的標準條件調節催化劑的加入量。

    表二 超低凝膠制備凝固時間表

    環境溫度

    20

    25

     

    分離膠配制

    濃縮膠配制

    分離膠配制

    濃縮膠配制

    分離膠配制量

    5 ml

    -

    5 ml

    -

    濃縮膠配制量

    -

    2 ml

    -

    2 ml

    10%APS

    50 μl

    20 μl

    25 μl

    20 μl

    TEMED

    5 μl

    2 μl

    2.5 μl

    2 μl

    凝固時間

    5-10 分鐘

    20-30 分鐘

    5-10 分鐘

    20-30 分鐘

    2.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

    3.靜置5-10分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

    II 配制濃縮膠

    去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

    1.按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    2.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

    3.靜置20-30分鐘待凝膠聚合

    . 電泳:

    1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:

    將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。

    表三 1×TTS緩沖液配制

     

    1×TTS配制量 500 ml

    1×TTS配制量 1000 ml

    10×TTS

    50 ml

    100 ml

    超純水

    450 ml

    900 ml

    注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。

    2. 樣品處理:

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat NoTP050]等體積混合,75℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液,根據說明書上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要75℃處理5-10分鐘)。

    將電泳槽的內槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經過處理)加入點樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。

    表四 多肽電泳條件

    恒電壓

    150V

    起始電流

    60-75mA/板膠

    結束電流

    15-25mA/板膠

    電泳時間

    2.5-3小時

     

     

     

     

     

     

    . 染色(使用組分9-FastBlue蛋白染色液):

    用前必讀:

    1 使用前如發現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

    2以下“使用方法”是針對0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

    使用方法:

    1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

    2. 搖床上常溫搖動10-15分鐘。

    3. 觀察結果。

    注意事項:

    1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長染色的時間。

    2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無必要。

    3. 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請延長染色時間。

    4. 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

     

     

    緩沖液配方:

    1. 10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

    組分濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

    Tris base 121.1 g

    Tricine    179.2 g

    SDS         10 g

    ddH2O      to1 L 

    Do not adjust the pH (~pH 8.3)

    2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液(10ml)  (Cat No:TP050)

    組分濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31gDTT

    2mg 考馬斯亮藍G-250

    用滅菌ddH2O定容至10ml

    混勻分裝-20℃貯存備用


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