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·PCR
 
 





蛋白濃縮試劑盒
 產品貨號: RTD9101
 產品名稱: 蛋白濃縮試劑盒
 產品價格/規格: 50次 300元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2020-04-11
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     TCA蛋白濃縮試劑盒(目錄號:RTD9101


    試劑盒內容及保存:TCA Protein Precipitation Kit

    貨號

    產品名稱

    規格

    貯存

    RTD9101-01

    試劑A-沉淀溶液

    10 ml

    RT

    RTD9101-02

    試劑B-漂洗溶液

    30 ml

    RT

    RTD9101-03

    試劑C-助沉劑

    5 ml

    RT

    RTD9101-04

    試劑D-中和液

    250 μl

    RT

    RTD9101-05

    1 M NaCl

    1 ml

    RT

    RTD9101-06

    1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

    1 ml

    -20℃

    RTD9101-07

    40 mM碳酸鈉

    1 ml

    RT

     

    說明書

    1

     

    儲存條件和效期:

    試劑盒常溫運輸;收到后,按照標簽溫度貯存;本試劑盒有效期1年。

    產品簡介:

    試劑盒原理:在酸性條件下,三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA)與蛋白質形成不溶性鹽,使蛋白質變性導致構象發生改變,蛋白暴露出較多的疏水性基團,蛋白發生聚集而沉淀。為了避免TCA對后續電泳的影響,沉淀的蛋白要使用洗滌液徹底清洗去除TCA。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。

    以每次濃縮800 μl蛋白樣品計算,本試劑盒可以使用40-45次。

    操作方法:

    1.  準備1.5 ml干凈的離心管,加入800 μl蛋白樣品溶液。

    可選:如果樣品溶液中離子強度低于10mM,補加8 μl的1M NaCl溶液。

    低于800 μl的樣品,加入8 μl 1M NaCl,用水補齊體積至800 μl,使NaCl終濃度為10mM。

    2. 加入80 μl 試劑C-助沉劑,混勻,常溫靜置15分鐘。

    注:加入試劑C后溶液變渾濁。

    3.  加入1/4體積220 μl的試劑A,渦旋震蕩10-30秒,使之充分混勻。

    4.  冰浴放置15分鐘。

    5. 4℃,12000 rpm(13000 g)離心10 分鐘。 注:離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。

                       左為加入助沉劑;右沒有加入助沉劑

    6.  小心去掉上清液,保留沉淀。

    注:請小心操作,可以用移液器輔助徹底吸棄上清。

    7.  沉淀中加入600 μl試劑B,渦旋震蕩10-30秒,徹底混勻。

       注:試劑B有刺激性氣味,請在通風櫥內操作。

    8.  冰浴15分鐘。

    9. 4℃,12000 rpm(13000 g) 離心10分鐘;在通風櫥中,倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄,沉淀物通風晾干30-60秒。注:沉淀不能過分干燥,否則將導致蛋白不好溶解。

    10. 蛋白溶解:

    根據下表選擇溶解緩沖液:

    下游實驗

    溶解緩沖液

     

    備注

    SDS-PAGE電泳

    1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

    試劑盒提供

    加入溶解緩沖液后,徹底溶解沉淀(37℃溫浴處理),溶液正常顏色應為藍色;如果溶液為淡綠色或黃色,加入1/10體積中和液D,使顏色變回藍色。 95℃ 處理5分鐘,電泳上樣

    BCA蛋白定量

    40mM 碳酸鈉pH11.25

    試劑盒提供

    BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度

    等電聚焦IEF/2D電泳

    7M尿素,2M硫脲,40mM Tris1%C7B2O1% ASB-14 pH10.4

    試劑盒不提供

     

    酶切實驗

    100 mM碳酸氫銨 pH8.5

    試劑盒不提供

     

    實驗示例:



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