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2×CTAB提取緩沖液
 產品貨號: RTG2405
 產品名稱: 2×CTAB提取緩沖液
 產品價格/規格: 200ml 150元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2020-05-04
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  • 2×CTAB提取緩沖液

    ● 產品編號及規格:

    貨號

    名稱

    規格

    貯存

    RTG2405-01

    2×CTAB提取緩沖液

    200 ml

    RT

    BME

    還原劑

    1 ml

    RT

     

    說明書

    一份

     

    ● 產品介紹:

        CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物而不沉淀核酸。通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。

        2×CTAB提取緩沖液成分:2%(w/v)CTAB100mM Tris (pH 8.0)20mM EDTA,1.4 MNaCl,,還原劑(隨用隨加)

    ● 儲存條件:

       常溫貯存一年。

    ● 實驗操作步驟:

    DNA提取:

       1. 2×即用型CTAB提取液(現用現配)配制:

    按照終濃度0.2% (v/v)加入還原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

    2. 取0.2-0.5新鮮植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 將粉末轉入預冷的1.5ml離心管中,立即加入65℃預熱的0.7 ml 2×即用型CTAB提取緩沖液,65水浴30分鐘,間歇混勻。

      注:CTAB溶液在低于15℃時會形成沉淀析出,因此,在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低于15℃。

    4. 加入等體積的酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕緩顛倒離心管混勻8-10次,常溫12000 rpm 離心10分鐘。

    5. 將上清液轉入另一1.5ml離心管中,加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),顛倒離心管混勻8-10次,常溫12000 rpm離心10分鐘。

    6. 將上層水相轉入新的1.5 ml離心管中,加入0.6倍體積的冰冷異丙醇,輕柔混勻,冰浴30分鐘。

    7. 12000 rpm4℃離心10分鐘。

    8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,412000 rpm 3分鐘,吸棄乙醇。

    9.4℃12000 rpm 1分鐘,用移液器吸盡殘余乙醇,超凈臺吹干沉淀。

    注:沉淀不能徹底干燥,否則不好溶解。

    10. 加入30-50μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA,-20保存備用。

    RNA提取:

    1. 2×即用型CTAB提取液(現用現配)配制:

    按照終濃度1 % (v/v)加入還原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入10 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

    2. 取50-100 mg新鮮植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 將粉末轉入預冷的1.5ml離心管中,立即加入65℃預熱的0.5 ml 2×即用型CTAB提取緩沖液,65水浴5-10分鐘,間歇混勻。

      注:CTAB溶液在低于15℃時會形成沉淀析出,因此,在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低于15℃。

    4. 加入等體積的酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕緩顛倒離心管混勻8-10次,常溫12000 rpm 離心10分鐘。

    5. 將上清液轉入另一1.5ml離心管中,加入等體積氯仿,顛倒離心管混勻8-10次,常溫12000 rpm離心10分鐘。

    6. 將上層水相轉入新的1.5 ml離心管中,加入終濃度4 M LiCl,輕柔混勻,-20℃ 30分鐘。

    7. 12000 rpm4℃離心10分鐘。

    8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,412000 rpm 3分鐘,吸棄乙醇。

    9.4℃12000 rpm 1分鐘,用移液器吸盡殘余乙醇,超凈臺吹干沉淀。

    注:沉淀不能徹底干燥,否則不好溶解。

    10. 加入30-50μl的RNase-free水溶解RNA,-80保存備用。

     


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