免費咨詢電話: 400-699-0631      點擊這里給我發消息
 
 
 
產品分類
 
·PCR
 
 





全血基因組DNA小量提取試劑盒
 產品貨號: RTG2406
 產品名稱: 全血基因組DNA小量提取試劑盒
 產品價格/規格: 50次 700元
 產品說明書: 暫無
 更新時間: 2020-04-21
詳細信息   訪問次數:

  • 產品介紹
  • 發表文章
  • 相關產品


  • 全血基因組DNA小量提取試劑盒

    Total DLood DNA Miniprep Kit

    試劑盒內容及保存:

    試劑盒組成

    RTG2406

    50次)

    貯存方式

    緩沖液DL1

    16 ml

    常溫

    緩沖液DL2

    16 ml

    常溫

    去蛋白液GD(濃縮液)

    30 ml

    常溫

    漂洗液PW(濃縮液)

    25 ml

    常溫

    洗脫緩沖液EB

    15 ml

    常溫

    吸附柱CG

    50

    常溫

    收集管(2 ml

    50

    常溫

    說明書

    1

     

    儲存條件和效期:

    該試劑盒常溫貯存,常溫運輸。開封后有效期一年。

    產品簡介:

    全血基因組DNA 小量提取試劑盒可從200-400 μl體積新鮮、冷凍或抗凝全血樣本中快速分離純化基因組DNA。該試劑盒可以在30分鐘內完成單個或多個樣品的操作。 提取過程無需使用蛋白酶K消化,不需要酚氯仿抽提, 也無需耗時的異丙醇沉淀等過程 。

    使用該試劑盒提取到的DNA 可以用于PCR,Southern雜交,酶切消化等實驗。

    準備工作:

    1. 準備無水乙醇;制冰機;1.5ml離心管;2ml離心管;離心機

    2. 按照標簽所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇,混勻后蓋緊瓶蓋后常溫貯存備用。

    3. 每次使用前請檢查緩沖液DL1和DL2是否有沉淀生成,如果出現沉淀,37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。

    標準操作步驟:

    如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在常溫下離心。

    注意:以下方案適用于400 μl體積新鮮或冷凍血液樣本。如果使用低于400 μl的全血樣本,必須按比例減少緩沖液DL1和DL2的用量或者用1×PBS溶液補齊至400 μl,嚴格按照緩沖液DL1:全血:緩沖液DL2=343體積比進行操作,否則將導致后續操作無法進行。

    1. 加入300μl緩沖液DL1于1.5 ml離心管中。

    2. 加入400 μl抗凝全血,漩渦劇烈震蕩30秒。 注:如果低于400 μl血液,用1×PBS補齊到400 μl。

    3. 加入300μl緩沖液DL2,劇烈搖動離心管3-5次,漩渦劇烈震蕩30秒-60秒。

    注:加入緩沖液DL2后,會出現大量血紅蛋白沉淀,必須劇烈震蕩。

    4. 12000 rpm 離心2分鐘。

    5. 把吸附柱裝在2ml收集管中(已提供),將第4步得到的上清溶液全部轉入柱中(小心別觸及沉淀),12000 rpm離心1min,倒棄流出液重新套上收集管。

    注:吸附柱的承受最大體積是700 μl,如上清超過此體積,可分2次離心,保證所有上清都加到柱中。

    6.加入500 μl 去蛋白液GB(注意是否已經加入乙醇)至柱子中,12000 rpm離心1min,棄去流出液。

    注:吸附柱膜上會有血色素殘余,這是正常現象,可以被去蛋白液GD和漂洗液PW洗去。

    7. 將吸附柱重新套回2ml收集管中,加入700μl 漂洗液PW(注意是否已經加入乙醇)至柱子中,12000 rpm離心1min,倒棄流出液;

    8. 再加入500μl 漂洗液PW至柱子中,12000 rpm離心1min, 棄去流出液;

    9. 將吸附柱重新套回2ml收集管中,12000 rpm離心空結合柱2 min以干燥柱子的基質;

    注:這一步驟至關重要,不要省略。 否則殘余乙醇會影響后續酶切或PCR實驗。

    10. 將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-80 μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB或滅菌去離子水至柱子的膜中央。 常溫靜置2 min; 

    注: 洗脫緩沖液體積最好不少于50 μl,體積過小影響回收效率。

      洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低于7.0會降低洗脫效率。

    11. 12000 rpm離心 2 min洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

    DNA濃度及純度檢測:

    基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。可配制0.8-1.0%瓊脂糖凝膠,使用λ/HindIII判斷基因組的大小,完整的基因組大小應在23kb以上。使用分光光度計檢測時, OD260/OD280比值應為1.7–1.9之間,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水洗脫,比值可能偏低,但并不表明DNA純度不高。

    常見問題分析:

    常見問題

    可能原因

    建議

    堵柱子

    樣本體積不對,裂解不完全

    未按照說明書使用指定體積操作,請嚴格按照緩沖液DL1:全血:緩沖液DL2=343體積比進行操作

    回收不到DNA或得率低

    堵柱子

    見上

    化療病人全血中提取DNA

    化療病人血液中白細胞數量減少,導致DNA數量降低

    全血樣品保存不當,導致全血溶血導致DNA降解

    4℃冰箱中貯存2周的全血開始出現溶血現象,此時DNA隨貯存時間延長會程序分解,最終導致分離不到電泳可見的DNA;全血應該-20℃或-80℃貯存。

    去蛋白液GD和漂洗液PW沒有按說明書加入乙醇稀釋

    使用前按說明書加入適量的無水乙醇進行稀釋

    DNA純度差

    A260/A280比率接近2.0

    考慮全血樣品的新鮮程度。陳舊全血中的DNA會降解成小片段DNA或核苷酸混合物,導致A260讀數變大

    DNA中有RNA污染

    使用非常新鮮的全血提取DNA時電泳結果會有RNA污染,RNA不能作為擴增模板,不會影響PCR擴增。如要去除RNA,可在步驟1加入緩沖液DL1時同步加入5 μl RNaseA溶液(10mg/ml

    洗滌時柱中有帶顏色的遺留物

    未按照說明書使用指定體積操作

    請嚴格按照緩沖液DL1:全血:緩沖液DL2=343體積比進行操作

    去蛋白液GB和漂洗液PW沒有按說明書加入乙醇稀釋

    使用前按說明書加入適量的無水乙醇進行稀釋

     實驗示例:

    400μl human blood gDNA 上樣5μl


    人血液基因組擴增人β-球蛋白 1.3kb 片段




TOP】【打印本頁】【關閉窗口



中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版權所有 京ICP備12052607 網站管理   快遞查詢   IF查詢
電話:010-58437227 免費電話:400-699-0631 傳真:010-57909566
點擊這里給我發消息   內勤訂貨QQ:2446698252   技術支持QQ:460449375 電子郵箱:[email protected]
注意:公司所有產品僅供科研使用
_×
在線咨詢
香港黄大仙精选资料网站