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10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液
 產品貨號: AP5015
 產品名稱: 10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液
 產品價格/規格: 1升 150元
 產品說明書: 暫無
 更新時間: 2020-04-06
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    產品編號

    產品名稱

    規格

    AP5015

    10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液(粉末)

    1

    簡介:

    10×酸性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液適用于酸性蛋白電泳后凝膠上非變性酸性蛋白的轉膜。本轉膜液配制便捷,稀釋后無需調節pH值。緩沖液中不含任何變性劑,保證了轉膜中維持蛋白的活性狀態。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液。

    保存條件:

    常溫保存,兩年有效。

    配制方法:

    10×轉膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中,徹底溶解,即配成10×轉膜緩沖液。根據下表配制成1×即用型轉膜緩沖液

     

    1×即用型轉膜緩沖液

     

    500 ml

    1 L

    10×轉膜緩沖液

    50 ml

    100 ml

    超純水

    450 ml

    900 ml

     

    不用調節pH

    使用方法:

    1. 酸性蛋白非變性電泳:

    各種蛋白質分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同,因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質稱為堿性蛋白,等電點偏堿性,pI>7,如組蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質,等電點就偏酸性,pI<7,自然界中大多數蛋白都是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候,要利用低 pH 凝膠系統,分離酸性蛋白時候,要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統,蛋白會帶負電荷,蛋白會相陽極移動;而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環境下進行,蛋白帶正電荷,這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。酸性蛋白電泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6130)。

    2. 轉膜:

    轉膜方法:酸性蛋白在非變性狀態的轉膜建議用濕轉法。

      三明治結構:由于酸性蛋白pI<7 在堿性轉膜緩沖液中帶負電荷,轉膜三明治結構與傳統轉膜相同,即根據“黑膠白膜”制作三明治,即膜置于轉膜夾芯正極一側,凝膠置于轉膜夾芯負極一側,這樣凝膠上帶負電荷的酸性蛋白才能轉移到膜上。

    酸性蛋白轉膜三明治制作:

    負極(電轉夾黑色面)-海綿墊-35層濾紙-凝膠--35層濾紙-海綿墊-正極(電轉夾白色面)

      膜的選擇:膜可以用PVDF膜或NC膜,根據蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來,大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑,低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化,NC膜只需用轉膜緩沖液潤濕就可以。

      轉膜條件:

    由于在非變性條件下,不同酸性蛋白的空間結構,聚合狀態,電荷數量都有不同,以下轉膜條件僅供參考,客戶針對自己的目的蛋白,最好經過1-2次預實驗后,確定最佳的轉膜條件。

    蛋白大小

    穩流

    建議時間

    降溫措施

    低于70kD

    180 mA

    2 小時

    需要

    高于70kD

    300 mA

    1.5 小時

    需要



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