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DNA尿素PAGE電泳試劑盒
 產品貨號: RTE4102
 產品名稱: DNA尿素PAGE電泳試劑盒
 產品價格/規格: 10次 600元
 產品說明書: 暫無
 更新時間: 2020-04-06
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  •  DNA尿素PAGE電泳試劑盒(貨號RTE4102

                     DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit

    產品組成:

    貨號

    名稱

    規格

    保存條件

    AC2914

    40%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    TB001

    5×TBE

    500 ml

    RT

    RU5080

    尿素(電泳級)

    220 g

    RT

    AP020P

    APS(干粉)

    5 ml

    RT

    (配制后-20貯存)

    TA0761

    TEMED

    0.5 ml

    4,避光

    DL080

    2×TBE尿素上樣緩沖液 (尿素變性膠)

    1 ml

    4

    產品簡介:

    DNA尿素 PAGE 電泳是研究寡核苷酸電泳的重要研究手段。可以檢測2-500堿基的寡核苷酸片段,理論上可以分辨出相差一個核苷酸的片段。

    本公司提供的DNA尿素PAGE電泳試劑盒包含凝膠制備及電泳所需的全部試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制各種濃度的PAGE膠,使用方便。

    按照每次制備7 ml 8%凝膠計算,試劑盒可使用至少70次;按照每次制備50 ml 8%凝膠計算,試劑盒可使用10次。

    貯存和運輸:

        試劑盒按照標簽溫度貯存,有效期一年。試劑盒常溫運輸。

    使用說明:

    一、制備凝膠:

    10% APS配制-5 ml

    將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

    1.1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

    1.2.根據表格,將不同體積的成分混合,漩渦攪拌至尿素徹底溶解。

    表一 配制不同濃度凝膠所需各組分的體積(毫升) 8×10cm 1.0mm厚度)

    單鏈DNA長度

    最佳凝膠濃度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1ml

    5×TBE

    ml

    補水到總體積

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    2.94

    0.875

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    50-400 nt

    8%

    2.94

    1.4

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    30-300 nt

    10%

    2.94

    1.75

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    10-150 nt

    15%

    2.94

    2.625

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl


    表二 配制不同濃度凝膠所需各組分的體積(毫升) (大板膠)

    單鏈DNA長度

    最佳凝膠濃度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1ml

    5×TBE

    ml

    補水到總體積

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    21

    6.25

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    50-400 nt

    8%

    21

    10

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    30-300 nt

    10%

    21

    12.5

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    10-150 nt

    15%

    21

    18.75

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    1.3. 在凝膠模具中灌入適量凝膠溶液,在膠的液面距離達到頂部時停止灌膠,插入梳子;常溫靜置30-60分鐘。

    注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

    1.4. 拔出梳子,1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次,去除殘余的尿素

    二、電泳:

    2.1. 預電泳:電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200V預電泳30分鐘。

    注:試劑盒配套的5×TBE緩沖液僅夠配制凝膠用,1×TBE電泳緩沖液請自己制備,配方如下:

    1×TBE   89 mM Tris, 89 mM boric acid, 2 mM EDTA-Na 。

    2.2.  取 3-5 μl樣品,加入等體積2×TBE尿素上樣緩沖液,70℃處理5 分鐘后立即冰浴,上樣。

    2.3.  連接電源線,打開電源開關,按照以下條件電泳。

     

    恒電壓

    起始電流

    結束電流

    電泳時間

    適用條件

    推薦電壓

    200V

    15-20 mA/板膠

    10-15 mA/板膠

    60+ min

    最佳電壓,最優的分辨率

    2.4.  等待上樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到凝膠底部時終止電泳,取出凝膠進行后續實驗。

    變性膠濃度

    溴酚藍

    二甲苯菁

    5%

    35 nt

    130 nt

    8%

    19 nt

    75 nt

    10%

    15 nt

    55 nt

    15%

    10 nt

    52 nt

    三、染色:

    3.1 單鏈DNA可以用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5102)或核酸快速銀染試劑盒(貨號:RTS5101)進行染色。

    實驗示例:

    1.    使用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5103)染色:

                             

     

    2.    使用核酸PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5102)染色:

                      



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