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·PCR
 
 





單鏈DNA Marker(25-75 nt)
 產品貨號: RTM501
 產品名稱: 單鏈DNA Marker(25-75 nt)
 產品價格/規格: 50次
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 更新時間: 2020-04-07
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  • 單鏈DNA Marker25-75 nt

     

    ● 產品編號及規格:

     

    貨號

    名稱

    規格

    貯存

    運輸

    RTM501

    單鏈DNA Marker25-75 nt

    125 μl

    -20℃

    濕冰

    DL080

    2×TBE尿素上樣緩沖液

    1 ml

    4℃-20

    濕冰

     

    ● 產品簡介:

    單鏈DNA  Marker由不同長度的單鏈DNA分子混合而成,8條帶的大小為20,25,30,35,40, 50,50,75nt。樣品保存在 TE緩沖液中,35nt 濃度為0.8μg/μl,其余條帶濃度為0.4 μg/μl。使用前與等體積2×TBE尿素上樣緩沖液混合即可上樣電泳。該Marker適用于跑尿素變性膠,電泳后使用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5102)或核酸快速銀染試劑盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的條帶分離效果。

    產品內附帶2×TBE尿素上樣緩沖液(Cat:DL080)。以每次上樣5 μl計算,混合好的單鏈DNA Marker可以使用大約50次。

    ●  保存條件和運輸:

    -20℃貯存,有效期24個月;濕冰運輸。

    ● 使用方法:

    注:以下使用方法均以8×10cm凝膠 1.0mm示例,其他規格凝膠請適當調整。

    . 凝膠制備:

    1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒(Cat:RTE4102))或按照以下程序制膠。

    表一 配制不同濃度凝膠所需各組分的體積(毫升) 8×10cm 1.0mm厚度)

    單鏈DNA長度

    最佳凝膠濃度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1ml

    5×TBE

    ml

    補水到總體積

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    2.94

    0.875

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    50-400 nt

    8%

    2.94

    1.4

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    30-300 nt

    10%

    2.94

    1.75

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    10-150 nt

    15%

    2.94

    2.625

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    加入10%APS和TEMD后,立即混勻,凝膠常溫(25℃)靜置30-40分鐘。

    注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

    . 樣品制備:

    2.1 取適量體積單鏈DNA  Marker樣品與等體積的2×TBE尿素上樣緩沖液(Cat:DL080)混合,70℃處理5分鐘,冰浴制冷后待上樣。待測樣品也需要進行同樣處理。

    .電泳:

    3.1. 預電泳:電泳槽內外加入適量1×TBE緩沖液穩壓200V預電泳30分鐘。電泳結束后,1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次,去除殘余的尿素

    3.2.上樣:根據梳齒確定Marker上樣量, 一般是10齒1mm厚梳子上樣5 μl,15齒1mm厚梳子上樣3 μl

    3.3. 連接電源線,打開電源開關,按照以下條件電泳。

     

    恒電壓

    起始電流

    結束電流

    電泳時間

    適用條件

    推薦電壓

    200V

    15-20 mA/板膠

    10-15 mA/板膠

    60+ min

    最佳電壓,最優的分辨率

    3.4. 等待上樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到凝膠底部時終止電泳,取出凝膠進行后續實驗。

    變性膠濃度

    溴酚藍

    二甲苯菁

    5%

    35 nt

    130 nt

    8%

    19 nt

    75 nt

    10%

    15 nt

    55 nt

    15%

    10 nt

    52 nt

    四.染色:

    4.1. 用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5102)或核酸快速銀染試劑盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的條帶分離效果。

    注:如果使用核酸染料染色,RealSafe Gold核酸染料結合單鏈核酸效果最佳,強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed,Goldview,EB等染色效果不好。

    ● 注意事項:

    1. 單鏈DNA Marker產品適用于變性PAGE垂直電泳,不適用于非變性PAGE電泳或水平瓊脂糖凝膠電泳。

    ● 電泳示例:


     

     


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